Edycja genowa CCR5 w autologicznych komórkach T CD4 osób zakażonych wirusem HIV

CCR5 jest głównym koreceptorem ludzkiego wirusa upośledzenia odporności (HIV). Zbadaliśmy, czy specyficzna miejscowo modyfikacja genu ( edycja genu ) – w tym przypadku infuzja autologicznych limfocytów T CD4, w których gen CCR5 stał się trwale dysfunkcyjny przez nukleazę palca cynkowego (ZFN) – jest bezpieczna. Metody
Do badania zakwalifikowano 12 pacjentów w otwartym, niekandomizowanym, niekontrolowanym badaniu pojedynczej dawki autologicznych komórek T CD4 zmodyfikowanych ZFN. Pacjenci mieli przewlekłą aviremiczną infekcję HIV, podczas gdy otrzymywali wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową. Sześć z nich przeszło przerwanie leczenia przeciwretrowirusowego 4 tygodnie po wlewie 10 miliardów autologicznych limfocytów T CD4, z których 11 do 28% zostało genetycznie zmodyfikowanych za pomocą ZFN. Pierwszorzędowym rezultatem było bezpieczeństwo, oceniane na podstawie zdarzeń niepożądanych związanych z leczeniem. Drugorzędne wyniki obejmowały pomiary reaktywności immunologicznej i odporności na HIV.
Wyniki
Jedno poważne zdarzenie niepożądane było związane z wlewem zmodyfikowanych przez ZFN autologicznych komórek T CD4 i przypisano je reakcji transfuzji. Mediana liczby limfocytów T CD4 wynosiła 1517 na milimetr sześcienny w tygodniu 1, co stanowiło znaczny wzrost w stosunku do liczby preinfuzji wynoszącej 448 na milimetr sześcienny (P <0,001). Mediana stężenia komórek T CD4 zmodyfikowanych CCR5 po tygodniu wynosiła 250 komórek na milimetr sześcienny. Stanowiło to 8,8% krążących jednojądrzastych komórek krwi obwodowej i 13,9% krążących komórek T CD4. Zmodyfikowane komórki miały szacowany średni okres półtrwania 48 tygodni. Podczas przerwania leczenia i wynikającej z niego wiremii spadek liczby krążących komórek zmodyfikowanych CCR5 (-1.81 komórek na dzień) był znacznie mniejszy niż spadek liczby niemodyfikowanych komórek (-7,25 komórek na dzień) (P = 0,02). HIV RNA stał się niewykrywalny u jednego z czterech pacjentów, których można było ocenić. Poziom HIV we krwi u większości pacjentów zmniejszył się.
Wnioski
Autologiczne zapłodnione limfocyty T komórek T CD4 są bezpieczne w granicach tego badania. (Finansowane przez National Institute of Allergy and Infectious Diseases i inne; ClinicalTrials.gov number, NCT00842634.)
Wprowadzenie
Zdolność do tworzenia specyficznych dla miejsca modyfikacji (lub edycji ) ludzkiego genomu była celem w medycynie od momentu rozpoznania genu jako podstawowej jednostki dziedziczności.1,2 Wyzwaniem edycji genomu jest zdolność do generowania pojedyncza dwuniciowa przerwa w określonym punkcie cząsteczki DNA. Liczne czynniki, w tym meganukleazy, oligonukleotydy, które tworzą tripleksy DNA i peptydowe kwasy nukleinowe, zostały przetestowane i wykazano, że są ograniczone przez nieskuteczność.3-5 Inna klasa odczynników, nukleazy palców cynkowych (ZFN), okazały się uniwersalne dla genomu edycja, a stosowanie ZFN jest obecnie dobrze ugruntowane w wielu organizmach modelowych iw ludzkich komórkach.6,7
ZFN doskonale nadają się do inżynierii genomu, ponieważ łączą swoistość rozpoznawania DNA białek palców cynkowych (ZFP) z mocną, ale ograniczoną aktywnością enzymatyczną domeny rozszczepienia enzymu restrykcyjnego FokI (nukleaza) .6,7 ZFP, które zapewniają Specyficzność wiązania DNA, zawiera układ tandemowy palców cynkowych Cys2His2, z których każdy rozpoznaje około 3 par zasad DNA.8. Dla porównania, endonukleaza restrykcyjna typu IIS bakteryjnego, FokI, nie ma specyficzności sekwencji i musi dimeryzować w celu obcięcia DNA.9 Po cięcie dwuniciowe za pośrednictwem ZFN, DNA można naprawić przez rekombinację homologiczną lub łączenie niehomologiczne
[więcej w: laparoskopia endometrioza, badania prenatalne za i przeciw, prywatne ośrodki leczenia alkoholizmu ]

Powiązane tematy z artykułem: badania prenatalne za i przeciw laparoskopia endometrioza prywatne ośrodki leczenia alkoholizmu